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基因的PCR擴增和DNA熔解分析
點擊次數:2699 更新時間:2017-04-06

      TaqMan探針作為阻斷劑參與突變基因的PCR擴增和DNA熔解分析

TaqMan探針的非對稱PCR以及DNA熔解分析被應用于突變檢測,可有效用于臨床診斷。該方法簡單、成本低,在一個封閉的離心管中進行,可zui大限度的減少反應時間,減輕工作量,以及避免樣品間的交叉污染。盡管DNA熔解分析比DNA常規測序更加靈敏(兩者的突變檢測閾值分別為5%15%20%),但相比與那些工作量大且昂貴的生物技術,如焦磷酸測序和微滴型數字PCR而言,其靈敏度相差甚遠。Irina V. Botezatu等科學家證明,在一些特殊的非對稱PCR情況下,TaqMan探針可作為阻斷劑,能夠優先阻斷野生型等位基因的擴增,從而導致突變型等位基因的大量擴增。因此,使得BRAFNRAS突變基因的檢測靈敏度增加了10倍。

原文:

Irina V. Botezatu, Irina O. Panchuk, Anna M. Stroganova, et al. TaqMan probes as blocking agents for enriched PCR amplification and DNA melting analysis of mutant genes. BioTechniques 62:62-68 (February 2017).